摘要
島津Prominence LC-20A高效液相色譜儀系統(tǒng)
內(nèi)容
2007年，國(guó)內(nèi)外發(fā)生多起寵物因食用添加了三聚氰胺的寵物食品而致死的例子，大量相關(guān)產(chǎn)品被召回。2008年9月，國(guó)內(nèi)發(fā)生奶粉中三聚氰胺導(dǎo)致嬰幼兒腎結(jié)石和腎功能衰竭甚至死亡的惡性事件。
目前對(duì)于三聚氰胺的檢測(cè)，最常規(guī)的方法為LC方法。但由于該化合物含有三個(gè)有機(jī)氮基團(tuán)，極性強(qiáng)，在普通C18反相柱上難以保留，無(wú)法達(dá)到分離效果。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的HPLC方法基本都須加入離子對(duì)試劑以增加三聚氰胺的保留，但辛烷磺酸鈉等離子對(duì)試劑恰恰限制了LC-MS的應(yīng)用。本文采用新型的SCX-C18混合填料色譜柱測(cè)定三聚氰胺，該柱內(nèi)填充的是均勻混合的SCX和普通C18填料顆粒，兼具離子交換和反相分離的特點(diǎn)，檢測(cè)中不需加入離子對(duì)試劑，還可應(yīng)用與LCsolution聯(lián)機(jī)，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高。
儀器概況
本實(shí)驗(yàn)使用島津Prominence LC-20A高效液相色譜儀系統(tǒng)。LC-20A是島津制作所投入整體力量開(kāi)發(fā)的新一代高效液相色譜儀，具有以下特點(diǎn)：優(yōu)越的基本性能，輕松滿足客戶對(duì)儀器嚴(yán)格的要求；全自動(dòng)化操作，實(shí)現(xiàn)了分析的高效率；高度對(duì)應(yīng)網(wǎng)絡(luò)要求的綜合管理系統(tǒng)，改善分析工作環(huán)境。
本次實(shí)驗(yàn)所用儀器的具體配置為LC-20AD輸液泵，DGU-20A3在線脫氣，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱，SPD-20A紫外可見(jiàn)檢測(cè)器，CBM-20A控制器和LCsolution色譜工作站。
分析方法色譜柱：CAPcell Pak CR(1:4) 4.6×150mm 5μm
檢測(cè)波長(zhǎng)：243nm
流動(dòng)相：15mM醋酸銨緩沖液(pH3.0):乙腈=7:3
流速：1.2mL/min
柱溫：30℃
進(jìn)樣量：10μL
洗脫方式：等度洗脫。
樣品前處理方法 取奶粉樣品0.5g，準(zhǔn)確加入5mL三氯乙酸溶液和0.2mL乙酸鉛溶液，搖勻，超聲提取20min。轉(zhuǎn)入離心管，在10000r/min離心機(jī)上離心5min，取上清液, 0.45μm濾膜過(guò)濾，上機(jī)測(cè)定。
分析結(jié)果
1.保留時(shí)間與峰形
圖1為本方法檢測(cè)三聚氰胺標(biāo)樣的典型色譜圖（樣品濃度為5ug/mL）
圖1 三聚氰胺標(biāo)樣圖譜
由圖1可見(jiàn)，本方法所測(cè)三聚氰胺保留時(shí)間為9.38min，峰形尖銳，對(duì)稱性好。
2.精密度
取濃度為5μg/mL三聚氰胺標(biāo)樣，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果如表1所示。
|
編號(hào)
|
保留時(shí)間(min)
|
峰面積(μV.S)
|
|
1
|
9.378
|
113178
|
|
2
|
9.388
|
112902
|
|
3
|
9.397
|
112677
|
|
4
|
9.397
|
112874
|
|
5
|
9.409
|
112909
|
|
Average
|
9.394
|
112908
|
|
%RSD
|
0.12
|
0.16
|
表1 保留時(shí)間與峰面積的重現(xiàn)性
由表1結(jié)果可見(jiàn)，本方法測(cè)定三聚氰胺具有良好的精密度和重現(xiàn)性。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線 取標(biāo)準(zhǔn)品，用緩沖液稀釋成濃度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別進(jìn)樣，得到校準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖2)。
圖2 校準(zhǔn)曲線
結(jié)果表明，該方法線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9999。
4.加標(biāo)回收率 取奶粉空白樣品，加入不同濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，使奶粉中最終含量分別為0.5mg/kg、5mg/kg和50mg/kg，結(jié)果如下：
圖3 空白奶粉
圖4 空白奶粉添加0.5mg/kg三聚氰胺
圖5 空白奶粉添加5mg/kg三聚氰胺
圖6 空白奶粉添加50mg/kg三聚氰胺
加樣回收率結(jié)果如表2所示。
|
加樣量(mg/kg)
|
計(jì)算結(jié)果(mg/kg)
|
回收率
%
|
平均回收率%
|
|
0.5
|
0.55
|
109.3
|
115
|
|
0.60
|
120
|
|
5.0
|
4.56
|
91.2
|
92.9
|
|
4.72
|
94.5
|
|
50
|
48.6
|
97.2
|
97.8
|
|
49.2
|
98.4
|
表2 3個(gè)不同濃度樣品回收率
5.檢測(cè)限和定量限
用軟件計(jì)算出奶粉中三聚氰胺含量檢測(cè)限為0.43mg/kg ，定量限為1.31mg/kg。
6.實(shí)際樣品分析結(jié)果 按本方法測(cè)定某品牌的奶粉，得到的圖譜如圖7所示。兩份重復(fù)樣品中測(cè)得三聚氰胺的濃度分別為19.7和19.8mg/kg，重現(xiàn)性良好。(用反相離子對(duì)色譜法測(cè)得的兩次結(jié)果分別為19.1和19.2 mg/kg)
圖7 某品牌陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果
結(jié)論
本方法定量限為1.31mg/kg，具有操作簡(jiǎn)單方便，靈敏度較高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。流動(dòng)相中不用加入離子對(duì)試劑，為LCMS的分析提供了可能。且樣品經(jīng)提取后可不用經(jīng)過(guò)SPE步驟即可進(jìn)樣，大大簡(jiǎn)化了分析過(guò)程，節(jié)省了分析成本。本方法適合奶粉中三聚氰胺含量的測(cè)定，特別是大批量樣品的低成本快速檢測(cè)。
相關(guān)資料