戴安P680型高效液相色譜儀（含自動(dòng)進(jìn)樣器）使用操作規(guī)程

1 按下穩(wěn)壓電源工作電源開關(guān)鍵至“ON”狀態(tài)。依次接通P680型輸液泵、ASI-100自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測器、電腦。
2更換蠕動(dòng)泵清洗瓶中5%的甲醇(如果儀器經(jīng)常使用則建議每周更換兩次，如果儀器很少使用則每次使用前必須更換。)
3確認(rèn)洗針瓶中的洗液是否太少，若太少,則需補(bǔ)充或更換。洗液一般為：50%的甲醇。
4 排泵內(nèi)氣泡
4.1擰松泵右側(cè)的快速清洗閥（反時(shí)針兩圈左右）。按下泵前面板右下方的“Purge”鍵, 排泵內(nèi)氣泡，儀器將以6.0 ml/min的速度自動(dòng)快速清洗泵內(nèi)殘留的氣泡，5分鐘將自動(dòng)停止。若想手動(dòng)停止，則再按 “Purge”鍵，將停止清洗。
4.2 將每個(gè)需要使用的通道分別排完氣泡后，擰緊快速清洗閥(順時(shí)針擰緊，注意不要擰得過緊。)。
5系統(tǒng)聯(lián)機(jī)
5.1檢查確認(rèn)密碼鑰匙已與計(jì)算機(jī)聯(lián)結(jié)，鼠標(biāo)左鍵雙擊桌面下方工具欄的“Chromeleon”圖標(biāo)，打開 [Chromeleon Server Monitor]，點(diǎn)擊[Start]，待變色龍圖標(biāo)變成灰色，并顯示Chromeleon Server is running idle時(shí)，關(guān)閉[Server Monitor]。
5.2 鼠標(biāo)左鍵雙擊桌面的“Chromeleon”圖標(biāo)。雙擊右邊方框中的HPLC-Graphics.pan, 點(diǎn)擊泵模塊下的“Settings”鍵，將跳出泵的設(shè)定窗口,設(shè)置完成后，按右下方的“Close”關(guān)閉該界面。點(diǎn)擊自動(dòng)進(jìn)樣器模塊下的“Settings”鍵，將跳出進(jìn)樣器的設(shè)定窗口,設(shè)置完成后，按右下方的“Close”關(guān)閉該界面。點(diǎn)擊檢測器模塊下的“Settings”鍵，將跳出一個(gè)泵檢測器的設(shè)置窗口, 設(shè)置完成后，按右下方的“Close”關(guān)鍵該畫面。
6序列進(jìn)樣
6.1新建一個(gè)程序文件
6.1.1依次點(diǎn)擊File/New，選中“Program File”后,進(jìn)入程序編輯向?qū)Ы缑妗?br /> 6.1.2確認(rèn)泵的工作方式（“Isocratic”等度分析、“Ramp”二元梯度分析、“Multi-Step Gradient”多元梯度分析）、合適的流動(dòng)相通道及高/低壓極限和流速。
6.1.3自動(dòng)進(jìn)樣器的參數(shù)設(shè)置，每一個(gè)參數(shù)后面都有一個(gè)推薦值，一般不做改動(dòng)。
6.1.4通道的選擇，設(shè)定采集一個(gè)樣時(shí)需要采集的時(shí)間段（Acquisition Time），也可以不從0分鐘開始采集，也就是前面一段時(shí)間不采集信號(hào)。
6.1.5紫外信號(hào)的具體設(shè)置，設(shè)定檢測波長，波長帶寬，參比波長，參比波長帶寬。一般設(shè)定帶寬為1 nm，設(shè)定參比波長為600 nm，參比波長的帶寬為1 nm。
6.1.6設(shè)定完成后瀏覽程序參數(shù)，編輯、修改不適合處，最后單擊工具欄中的“保存”按鈕，給新建的這個(gè)程序起一個(gè)名字，若要新建一個(gè)文件夾，可點(diǎn)右上方的新建文件夾，然后將這個(gè)程序文件放入其中。
6.2建立方法文件
6.2.1依次點(diǎn)擊File/New，選中“Method File”后,進(jìn)入方法編輯向?qū)Ы缑妗７椒ㄎ募窃谶M(jìn)完樣后采集到譜圖進(jìn)行處理數(shù)據(jù)時(shí)需要用到的，所以現(xiàn)在不需要做任何改動(dòng)。不能夠等譜圖出來之后再去建方法文件。最好將它和剛才建的程序文件放在同一個(gè)文件夾里。
6.3建立新序列文件
6.3.1依次點(diǎn)擊File/New，選中建序列文件“Sequence (using Wizard)”，后進(jìn)入序列編輯向?qū)Ы缑妗?br /> .6.3.2設(shè)定樣品信息
6.3.2.1設(shè)定樣品名稱，如果待測樣品溶液名字一樣，只是序號(hào)是按順序遞加的，可以在方框的空白處輸入待測樣品溶液名，并通過右邊的三角箭頭使用“sample Number”,讓軟件自動(dòng)加上一個(gè)序號(hào)。 Number of 為待測樣品溶液的個(gè)數(shù)。Injection per為每個(gè)待測樣品溶液需要進(jìn)樣的次數(shù)。Start為第一個(gè)待測樣品溶液放在自動(dòng)進(jìn)樣器上的位置，如果所測的待測樣品溶液是按順序放在自動(dòng)進(jìn)樣器上的，則輸入第一個(gè)待測樣品溶液的位置，軟件會(huì)自動(dòng)輸入以下各個(gè)待測樣品溶液的位置。Injection為進(jìn)樣體積。
6.3.2.2設(shè)定好后，按左下方的“Apply”后，可將待測樣品溶液的信息在右方以列表的方式顯示出來。
6.3.3設(shè)定對(duì)照品信息
6.3.3.1同設(shè)定樣品信息。但有時(shí)候由于待測樣品太多，花的時(shí)候較長，為了防止保留時(shí)間漂移，峰面積有變化，消除系統(tǒng)的誤差等原因，需要采用間隔進(jìn)樣的方式進(jìn)樣。Variatio standards after each unknown意思為每進(jìn)幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液后進(jìn)幾個(gè)待測溶液，再進(jìn)個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液后進(jìn)幾個(gè)待測樣品溶液。
6.3.3.2設(shè)定好后，按左下方的“Apply”后，可將所有樣品溶液的信息在右方以列表的方式顯示出來，且標(biāo)準(zhǔn)溶液在前，待測樣品溶液在后。
6.4點(diǎn)擊圖標(biāo)進(jìn)入瀏覽器“Browse”界面，找到編輯好的序列。在此界面可以對(duì)序列進(jìn)行進(jìn)一步的調(diào)整，增加或減少樣品；改變樣品名、樣品類型、進(jìn)樣位置、進(jìn)樣量、分析程序、積分方法等參數(shù)，修改后保存序列。
6.5序列進(jìn)樣
6.5.1如果正在采集基線，則點(diǎn)工具欄中藍(lán)色小圓點(diǎn)，停止采集基線，將跳出如下窗口：提示您是否保存剛才正在采集的基線譜圖。如果要保存，則在“Save to sequence”前“√”后選擇一個(gè)保存路徑。通常是不保存的，則按右上方的“YES”鍵停止基線的采集。
6.5.2加入進(jìn)樣序列：擊工具欄上“Start /stop Batch”（開始/停止批進(jìn)樣）鍵，將跳出一個(gè)窗口，如果方框中有不需要做的序列（如果有，一般為上次未做完的序列），則選中后，點(diǎn)右邊的“Remove”鍵，將其移走。點(diǎn)右上方的“Add…”將需要進(jìn)樣的序列加入列表中。點(diǎn)擊底下右方的“Ready Check”，檢查設(shè)置好的程序、方法、序列有沒有錯(cuò)誤或儀器有沒有準(zhǔn)備好。如果顯示有紅色感嘆號(hào)圖標(biāo)，則說明有錯(cuò)誤。下圖顯示的信息為需要占有多大電腦空間和需要用掉多少流動(dòng)相，沒有其它錯(cuò)誤信息。單擊“ok”，完成檢查。
6.5.3開始進(jìn)樣：單擊“Start”，儀器將會(huì)自動(dòng)根據(jù)軟件中設(shè)定的先后順序開始進(jìn)樣，直至所有的樣品全部進(jìn)樣。若軟件中相應(yīng)的位置上并沒有放置樣品瓶，儀器將會(huì)自動(dòng)識(shí)別，并跳過該樣品進(jìn)下一個(gè)樣品。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)樣品進(jìn)完后，將會(huì)等待第二個(gè)樣品進(jìn)樣，這時(shí)候保留時(shí)間(Retention Time)顯示為0.00min。
7處理數(shù)據(jù)
7.1點(diǎn)擊控制面板上的“Browser”進(jìn)入需要處理數(shù)據(jù)的序列。
7.2選擇定量方法點(diǎn)擊方法文件“測試方法.qnt”。
7.2.1基本設(shè)置“Genernal”含量的單位后面輸入最后的計(jì)算出來的量的單位，液相樣品一般為濃度單位，固體一般要算百分含量。
7.2.2積分參數(shù)設(shè)定 “Detection”：Minimum Area：設(shè)定最小峰面積，一般設(shè)置0.01～10之間。低于設(shè)定值的將不會(huì)積分；Valley To Valley On：設(shè)置從峰谷到峰的積分；Inhibit Integration On：設(shè)定不積分段從什么時(shí)候開始不積分，Inhibit Integration Off：設(shè)定不積分段從什么時(shí)候結(jié)束不積分（ON和OFF是成對(duì)使用的。）；Fronting sensitivity Factory： 前沿峰靈敏度因子，一般設(shè)為2～4為宜；Tailing sensitivity Factory：拖尾峰靈敏度因子，一般設(shè)為2～4為宜；Rider Threshold：肩峰值。設(shè)定為100%，兩分不開的峰垂直分開單獨(dú)積分。
7.2.3峰表（Peak Table）設(shè)置：在第一列中輸入標(biāo)樣的名字；在第二列在輸入相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間；在第三列中輸入一個(gè)正負(fù)范圍，一般在設(shè)置值≤保留時(shí)間的5%；第四列為定量標(biāo)準(zhǔn)，一般為外標(biāo)法（External）；第五列為定量類型，一般以面積來定量（Area）；第六列為校正類型a) 單點(diǎn)校正一般做樣都是單點(diǎn)校正，所以選第一項(xiàng)：過原點(diǎn)的直線（Linear），b) 線性校正如果要做線性的話，就要選第二項(xiàng)：帶截距的直線（Linear with Offset）。其它設(shè)置都不用改動(dòng)。
7.2.4定量表（Amount Table）
7.2.4.1編輯列Edit Amount Column在表格的下方任何一位置點(diǎn)右鍵，選中“Edit Amount Column”,在“Assign standards on the”后面的下拉菜單中選擇“Name”， 右邊框中將會(huì)顯示有幾個(gè)標(biāo)樣。點(diǎn)擊左邊方框下的自動(dòng)生成列“Auto Generate，a) 做線性的話就選擇第一項(xiàng)（..separate..），表明要生成五個(gè)不同的列。b) 做單標(biāo)定量的話選擇第二項(xiàng)（..single..），表明生成一個(gè)列。在“Amount”列中輸入標(biāo)樣的濃度。
7.2.5校正（Calibration）如果有一點(diǎn)誤差較大（偏離直線較遠(yuǎn)），不想讓它參與校正。比如說第一個(gè)點(diǎn)不想要，則將對(duì)應(yīng)的“√”去掉，按確定即可。
7.2.6 保存剛才方法的更改。
8報(bào)告輸出：在“Browse”界面下，打開序列，雙擊需要處理的標(biāo)準(zhǔn)樣品文件，點(diǎn)擊菜單“View/Printer-Layout”，進(jìn)入需要打印的界面：類似于Excel電子表格，分好幾頁顯示，第一頁為基本譜圖和數(shù)據(jù)（Integration）；第二頁為：單標(biāo)的校正曲線（Calibration current peak）,顯示的有：線性圖、相關(guān)系數(shù)（Corr….）、截距(offset)、斜率(slope)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)；第三頁為：混標(biāo)的校正曲線（Calibration Batch）一般用不上；第四頁為：峰的分析。包括：基線噪音（Noise）、分離度（Resol.）、對(duì)稱性（Asym.）、理論塔板數(shù)（Plates）等；第五頁為：統(tǒng)計(jì)表（Summary）.一般都需要打?。坏谄唔摓樽V圖的重疊（Overlay print）。選擇合適的報(bào)告頁面，打印輸出。
9關(guān)機(jī)
9.1數(shù)據(jù)采集完畢后，在控制面板檢測器設(shè)定中，關(guān)燈，然后斷開儀器各部件的控制，關(guān)閉檢測器。
9.2按規(guī)定用適當(dāng)?shù)娜軇_洗色譜柱、管路、自動(dòng)進(jìn)樣器、進(jìn)樣針。確保沖洗干凈后，關(guān)閉各部分電源。
9.3退出色譜工作站，關(guān)閉電腦。
10.注意事項(xiàng)
10.1 泵
10.1.1如果流動(dòng)相中沒有電解質(zhì)（即緩沖鹽或酸等），最好用50%的甲醇沖洗約20～40分鐘后就直接用甲醇或乙腈沖洗流路約20～40分鐘。
10.1.2如果流動(dòng)相中有電解質(zhì)，需要先用5%的甲醇沖洗色譜柱約60分鐘后，最好用50%的甲醇沖洗約20～40分鐘后，再用純甲醇或乙腈沖洗流路約20～40分鐘。
10.1.3放置了一天或以上的水相或含水相的流動(dòng)相如需再用，需用微孔濾膜重新過濾。
10.1.4蠕動(dòng)泵清洗瓶中的5%的甲醇要求每周至少換二次。若液相使用頻率不高，建議每天使用前更換，以免水長細(xì)菌損壞泵中各組件。
10.1.5為了保證P680的安全運(yùn)行，必須設(shè)定高、低壓極限（一般安裝時(shí)已設(shè)置好）；
10.1.6流動(dòng)相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亞甲基氯、四氫呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、異丙醚、酮、甲基環(huán)己胺等，以免造成對(duì)柱塞密封圈的腐蝕。若需要使用正相系統(tǒng)分析樣品，需要另行安裝耐腐蝕的正相密封圈。
10.1.7擰松快速清洗閥時(shí)，不宜擰得過松。一般擰松2圈左右即可。擰得過松流動(dòng)相容易從清洗閥部位流進(jìn)泵頭中引起報(bào)警。
10.1.8使用快速清洗閥時(shí)，只能一個(gè)一個(gè)通道的排氣泡，不得將幾個(gè)通道同時(shí)按比例排氣泡，比例閥的快速切換易導(dǎo)致?lián)p壞。
10.1.9沒有配制脫氣機(jī)的，流動(dòng)相一定要超聲脫氣。有脫氣機(jī)的，泵電源開啟后，等脫氣機(jī)停止工作后再進(jìn)行泵的其它操作。
10.2自動(dòng)進(jìn)樣器
10.2.1自動(dòng)進(jìn)樣器建議用50%的甲醇洗針。
10.2.2每天使用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣前都要按一下控制面板上的“wash”鍵，儀器會(huì)自動(dòng)排除定量環(huán)和針中的殘留氣泡。
10.2.3每天洗針前要檢查一下洗針瓶中是否有洗液（50%甲醇）。
10.3 檢測器
10.3.1檢測器的紫外或可見燈在長期打開的情況下，一定要保證有溶液流經(jīng)檢測池。若不需要做樣，可設(shè)置一個(gè)較低的流速（如0.05ml/min）或關(guān)閉燈的電源。
10.3.2檢測器的燈一般是在流通池有溶液連續(xù)流動(dòng)幾分鐘后才開的。如果流動(dòng)池中有氣泡，則會(huì)提示漂移過大無法通過自檢和校正。
10.3.3檢測器的氘燈或鎢燈不要經(jīng)常開關(guān)，每開關(guān)一次燈的壽命約損失30小時(shí)。若儀器經(jīng)常使用，可幾天開關(guān)燈一次。
10.4 整個(gè)系統(tǒng)
10.4.1緩沖溶液與有機(jī)溶劑互相轉(zhuǎn)換前一定要用5%甲醇清洗泵，防止鹽在有機(jī)相中結(jié)晶損壞泵中各組件。
10.4.2緩沖溶液的濃度不能高于0.5 mol/L，pH范圍2～12，Cl-的濃度要小于0.1 mol/L（防止腐蝕流路）。
10.4.3儀器長時(shí)間不用，每個(gè)泵通道和整個(gè)流路一定要用甲醇沖洗后保存，以免結(jié)晶或造成污染。
10.4.4待測樣品或標(biāo)樣在流動(dòng)相中一定要易溶，否則進(jìn)樣后會(huì)結(jié)晶造成定量不準(zhǔn)確或堵塞色譜柱。
10.5軟件
10.5.1不要輕易地在windows窗口下刪除軟件所在根目錄或子目錄下的文件，以免造成軟件無法正常使用。
10.5.2儀器不使用時(shí)，密碼鑰匙不要經(jīng)常拆來拆去，容易導(dǎo)致密碼鑰匙損壞。
10.5.3采集紫外信號(hào)時(shí)，若分析物質(zhì)的最大波長已知，則盡量減少采集的通道個(gè)數(shù)，以免占用電腦的空間。
10.5.4軟件系統(tǒng)的配置（Server Configuration）在軟件安裝完成后，不要改動(dòng)。