PDS—1000\He型基因槍操作流程

PDS—1000\He 型基因槍操作流程
微彈的制備：
1、EP管稱取60 mg (或3mg)金粉；
2、加入1ml (或50ul)無水乙醇，振蕩1min,10000rpm離心10S；
3、棄上清，加入1ml(或50ul) 無菌水洗，振蕩1min,10000rpm離心10S；
4、棄上清，加入1ml(或50ul) 無菌水洗，振蕩1min, -20℃；
DNA的包裹
1、50ul金粉懸液于EP管；
2、依次加入5ul/3ul質粒DNA（1ug/ul）,50ul 2.5M CaCl2 和20ul 0.1M亞精胺（每加完一樣可振蕩3S），靜置10min； 
3、振蕩3S，冰上10min，10000rpm離心10S，棄上清；
4、80ul無水乙醇，震蕩重懸，10000rpm離心10S，棄上清；
5、10ul無水乙醇定容（重懸）；
6、每次用10ul點于微粒載膜中央，使其平鋪，晾至完全干燥，待用；
基因槍的操作
1、打開真空泵和基因槍的電源開關；
2、打開氦氣瓶閥門，旋轉氦氣調節(jié)桿，使氣壓高于所選可裂膜壓力200psi左右；
3、旋下可裂膜擋蓋，將可裂膜放在擋蓋中央，將擋蓋旋上，用專用板水平加固；
4、把微粒發(fā)射裝置移出轟擊室，旋下蓋子，放入阻擋網，把微粒載片安裝在固定槽中（有微粒的一面朝下），旋上蓋子，將發(fā)射裝置放回轟擊室；
5、將樣品盤放置在轟擊室的適當位置，關上轟擊室門；
6、按VAC開關(上檔)抽真空，當表上讀數為所需值時,開關打到HOLD（下檔），然后按住FIER開關，當達到適當壓力可裂膜自動破裂，松開FIER開關；
7、開關打到VENT（中間檔），以釋放轟擊室內的真空；
8、打開轟擊室門，取出樣品盤；
9、取出微粒發(fā)射裝置，卸下微粒載膜和阻擋網（阻擋網和微粒載膜放入70%的酒精浸泡）；
10、旋下可裂膜擋蓋，清除可裂膜碎片；
11、若PDS—1000\He 型基因槍不再使用，關掉氦氣瓶的主閥，按住FIER開關，按住FIE開關，放掉氣體加速管內的氦氣壓力，最后關掉一切電源；