高效液相色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)設(shè)計(jì)的變化趨勢
高效液相色譜法（HPLC 法）是藥物分析中常用的一種定性、定量色譜分析方法。具有較強(qiáng)的專屬性，相對較高的檢測靈敏度和良好的量化功能。2005版《中國藥典》使用 HPLC 法的品種中，色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)設(shè)計(jì)有了較大的變化：指標(biāo)更加細(xì)致、周到，檢測更重實(shí)效，色譜系統(tǒng)適用性的試驗(yàn)用溶液的制備方法也呈現(xiàn)多樣化，體現(xiàn)出一些變化趨勢。

１.色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)?zāi)康母悠ヅ?br /> 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的嚴(yán)格細(xì)膩程度取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。首先?yīng)考慮色譜系統(tǒng)被用于何種實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩碓O(shè)計(jì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。如果一個 HPLC 方法僅用于定性鑒別，就其色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)而言可以相對簡單寬松，只要可以確保被測成分峰與其他色譜峰有一定的分離度，具有適宜的出峰時間即可達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

如果用于定量分析（如含量測定），則除要保證被測成分峰具有適宜的出峰時間外，還需檢驗(yàn)系統(tǒng)是否能夠保證被測成分峰與其他色譜峰完全分離，分離度一般應(yīng)在1.5以上，同時還應(yīng)測試被測成分峰峰面積的重復(fù)性是否良好，對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5針的峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于２％，被測成分峰的峰型也應(yīng)基本對稱，以保證分離效果和測量精度。對于小峰（如占總面積10％以下的色譜峰）峰面積的定量，或用峰高法定量時，就應(yīng)對拖尾因子或?qū)ΨQ因子加以嚴(yán)格的規(guī)定，一般來說，拖尾因子應(yīng)在 0.95～1.05之間，因?yàn)榉宓膶ΨQ性對測量結(jié)果影響較大。

如果檢查某種藥品的有關(guān)物質(zhì)，且還需要分別檢查單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量，那么系統(tǒng)適用性試驗(yàn)還應(yīng)有一個重點(diǎn)，就是要有常見雜質(zhì)難分離物質(zhì)對分離度的測定指標(biāo)。此外系統(tǒng)的檢測靈敏度試驗(yàn)也就相對比較重要。如鹽酸二甲雙胍的有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下要求： 鹽酸二甲雙胍與雙氰胺的分離度應(yīng)大于1.5，檢測靈敏度要求調(diào)節(jié)雙氰胺峰高為滿量程的10％。 如 果色譜系統(tǒng)是一個梯度洗脫系統(tǒng)，有時一個難分離物質(zhì)對分離度的測試也不能完全達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。如果在梯度變化的前后均有需要檢測的雜質(zhì)，分離度的測定指標(biāo)一般應(yīng)根據(jù)需要在梯度變化之前和之后都可加以制訂。在梯度洗脫系統(tǒng)中某個成分峰的保留時間也經(jīng)常用來做系統(tǒng)適用性檢測的指標(biāo)，給出吐峰時間范圍，如頭孢地尼，主成分頭孢地尼峰的保留時間要求22分鐘，Ｅ-異構(gòu)體峰保留時間約為33分鐘，理論板數(shù)按頭孢地尼峰計(jì)算應(yīng)不低于 7000。

在2000年版《中國藥典》中，有些標(biāo)準(zhǔn)色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求就與其色譜系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌耆ヅ?。如有些品種含量測定與有關(guān)物質(zhì)共用一套色譜系統(tǒng)，且有關(guān)物質(zhì)還需要分別檢查單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量，但系統(tǒng)適用性試驗(yàn)指標(biāo)僅有一個理論板數(shù)的要求，或?qū)Ψ蛛x度的設(shè)計(jì)為“被測成分峰與相鄰雜質(zhì)峰間的分離度應(yīng)符合規(guī)定”這樣一個對系統(tǒng)性能緩沖空間很大的一個指標(biāo)要求。在2005年版《中國藥典》中，這種實(shí)屬很虛的指標(biāo)開始減少。如2000年版頭孢曲松反式異構(gòu)體（光降解產(chǎn)物）峰的保留時間應(yīng)為頭孢曲松峰保留時間的1.3倍，兩峰之間的分離度應(yīng)不小于3.0，理論板數(shù)按頭孢曲松峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，2005年版修訂為頭孢曲松峰和頭孢曲松反式異構(gòu)體峰間的分離度應(yīng)不小于6.0。

２.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液的制
備更加注重方便性、實(shí)用性和可操作性系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液的配制方法，最簡單的莫過于用主成分對照品與雜質(zhì)對照品混合配制，但有些雜質(zhì)對照品不能得到，如性質(zhì)不穩(wěn)定或與主成分理化性質(zhì)太接近，分離提取技術(shù)要求太高，成本太大等，但這些雜質(zhì)峰恰恰又是與主成分峰最難分離的色譜峰，且較常存在于 藥 品中需要檢查的，在2005年版《中國藥典》中，這一問題得到了較好的解決。如喹諾酮類藥物中較常出現(xiàn)光降解產(chǎn)物，而此光降解產(chǎn)物是引起這類藥物不良反應(yīng)的主要因素，所以需要在有關(guān)物質(zhì)檢查中做為重點(diǎn)檢測的雜質(zhì)之一。

因 此 ，在2005年 版 《 中 國 藥 典 》中，這些藥物系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液的制備就通 過把對照 品溶液進(jìn)行 光 照 處理，得到能產(chǎn)生明顯光降解產(chǎn)物色譜峰的溶液。

3.實(shí)驗(yàn)過程、操作步驟趨于嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范
色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)設(shè)計(jì)、規(guī)定的完備、靈敏度檢測試驗(yàn)的規(guī)范，溶劑的選擇、溶解制備方式等各方面均體現(xiàn)出對實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡睦斫飧用鞔_，對實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)考慮更加嚴(yán)謹(jǐn)周到，標(biāo)準(zhǔn)的書寫格式均更 加規(guī)范 、統(tǒng) 一 ，如2005年 版《中 國 藥典》收載的 β-內(nèi)酰胺類抗生素中檢查高分子聚合物的品種將原來收載的8個品種的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)均修訂與新增 13個品種項(xiàng)下書寫格式相同，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)統(tǒng)一為理論板數(shù)以藍(lán)色葡聚糖2000峰計(jì)算均不低于……。拖尾因子均應(yīng)小于2.0，在兩種流動相系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖 2000峰保留時間比值均應(yīng)在0.93～1.07之間，對照品溶液主峰與供試品溶液中聚合物峰與相應(yīng)色譜系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖 2000峰保留時間的比值均應(yīng)在0.93～1.07之間。