食物中鈣的測(cè)定方法
一、原子吸收光譜分光光度計(jì)法
1.原理
每種元素的原子能夠吸收其特定波長(zhǎng)的光能，而吸收的能量值與該光路中該元素的原子數(shù)目成正比。用特定波長(zhǎng)的光照射這些原子，測(cè)量該波長(zhǎng)的光被吸收的程度，用標(biāo)準(zhǔn)溶液制成校正曲線。根據(jù)被吸收的光量求出被測(cè)元素的含量。
2.適用范圍
依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)，鈣：GB12396-90。適用于所有食品及保健品中元素含量的測(cè)定，其元素含量在1mg/kg濃度以上。
3.儀器
原子吸收光譜分光光度計(jì)
4.試劑
（1） 硝酸（GB） 高氯酸（GB）
（2） 混合酸消化液：硝酸+高氯酸 按4：1混合
（3） 0.01mol/L 8-羥基喹啉溶液：
A. 配制1mol鹽酸（GB）溶液
B. 稱1克8-羥基喹啉,用1mol鹽酸定溶至10mL
C. 將上述溶液倒入容量瓶,定溶至1000mL。
（4） 1%鑭溶液：稱量11.725克La2O3（純度為99.99%），加25mL 鹽酸（GB），使之溶解，用去離子水定溶至1000mL，即成。
（5） 去離子水：（KΩ）80萬以上。
（6） 國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供的標(biāo)準(zhǔn)貯備液：鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)液濃度均為1000μg/mL
（7） 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控物：國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供的豬肝粉，室溫干燥保存。
（8）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制：吸取以上鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25mL,移入10 mL容量瓶中,然后用稀釋用溶液(鑭或8-羥基喹啉)定容至10mL。標(biāo)準(zhǔn)溶液須放聚乙烯瓶?jī)?nèi)，4℃冰箱保存
5.操作步驟
5.1樣品制備：每種樣品采集的總重量不得少于1.5Kg，樣品須打碎混勻后再稱重。鮮樣（如：蔬菜、水果、鮮魚等）應(yīng)先用水沖洗干凈后，再用去離子水充分洗凈，涼干后打碎稱重。所有樣品應(yīng)放在塑料瓶或玻璃瓶中4℃或室溫保存。
5.2 樣品消化：準(zhǔn)確稱取樣品干樣（0.3-0.7g左右）,濕樣(1.0g左右),飲料等其他液體樣品(1.0-2.0g左右),然后將其放入50mL消化管中,加混酸15mL左右,過夜。次日，將消化管放入消化爐中，消化開始時(shí)可將溫度調(diào)低（約130℃左右），然后逐步將溫度調(diào)高（最終調(diào)至200℃左右）進(jìn)行消化，一直消化到樣品冒白煙并使之變成無色或黃綠色為止。若樣品未消化好可再加幾毫升混酸，直到消化完全。消化完后，待涼，再加5mL去離子水，繼續(xù)加熱，直到消化管中的液體約剩2mL左右，取下，放涼，然后轉(zhuǎn)移至10mL試管中，再用去離子水沖洗消化管2-3次，并最終定溶至10mL。
樣品進(jìn)行消化時(shí)，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白消化。
5.3 測(cè)定：將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配置成不同濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，以備上機(jī)使用。
不同濃度系列標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的配制 元素
 儲(chǔ)備液濃度

μg/mL
 吸取量

mL
 稀釋體積

mL
 標(biāo)準(zhǔn)系列濃度

μg/mL
 稀釋用溶液

1%鑭溶液

或

8-羥基喹啉溶液
 
Ca
 25
 1.0

3.0

5.0
 25
                1.0

               3.0

               5.0
 

實(shí)驗(yàn)條件：測(cè)定鈣的波長(zhǎng)為422.7nm儀器狹縫為0.5nm，燈位置、及電流等均按儀器使用說明調(diào)制至最佳狀態(tài)，然后點(diǎn)火準(zhǔn)備測(cè)定，首先，以各標(biāo)準(zhǔn)系列繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后逐一測(cè)定空白及樣品，樣品及空白均應(yīng)先用8-羥基喹啉或1%鑭溶液稀釋后上機(jī)測(cè)定。
6.計(jì)算
根據(jù)儀器測(cè)定出的數(shù)據(jù)，代入公式進(jìn)行計(jì)算。
                  （c-c0）×V×f×100
X （mg/100g）= ----------------------------
                         m×1000
式中：
c----測(cè)定樣品中元素的濃度 mg/L
c0---空白值
V----樣品定溶體積 mL
f-----稀釋倍數(shù)
m----取樣量 g （固體重量為g ，液體為mL）
鈣的最低檢出限為0.1μg/mL
7.注意事項(xiàng)
樣品處理要防止污染，所用器皿均應(yīng)使用塑料或玻璃制品，使用的試管器 皿均應(yīng)在使用前泡酸，并用去離子水沖洗干凈，干燥后使用。樣品消化時(shí)注意酸不要燒干，以免發(fā)生危險(xiǎn)。

二、 滴定法 （EDTA法）
1原理
鈣與氨羧絡(luò)合劑能定量地形成金屬絡(luò)合物，其穩(wěn)定性較鈣與指示劑所形成的絡(luò)合物為強(qiáng)。在適當(dāng)?shù)膒H值范圍內(nèi)，以氨羧絡(luò)合劑EDTA滴定，在達(dá)到定量點(diǎn)時(shí)，EDTA就自指示劑絡(luò)合物中奪取鈣離子，使溶液呈現(xiàn)游離指示劑的顏色（終點(diǎn)）。根據(jù)EDTA絡(luò)合劑用量，可計(jì)算鈣的含量。
2.儀器
（1） 微量滴定管（1-2mL）
（2） 堿式滴定管（50mL）
（3） 刻度吸管（0.5-1mL）
（4） 試管
3.試劑
（1） 硝酸（GB） 高氯酸（GB）
（2） 混合酸消化液：硝酸+高氯酸 按4：1混合
（3） 25mol/L氫氧化鉀溶液：稱取71.13克氫氧化鉀，用去離子水定容至1000mL
（4） 1%氰化鈉溶液：稱取1.0克氰化鈉，用去離子水定容至100mL
（5） 0.05 mol/L檸檬酸鈉溶液：稱取14.7克檸檬酸鈉，用去離子水定容至1000mL
（6） EDTA溶液：稱取4.50克EDTA（乙二胺四乙酸二鈉），用去離子水定容至1000mL使用時(shí)稀釋10倍即可。
（7） 鈣紅指示劑：稱取0.1克鈣紅指示劑，用去離子水使其溶解并定容至100mL，此指示劑在4℃冰箱中可保存1個(gè)月。
（8） 去離子水：（KΩ）80萬以上
以上試劑均需使用優(yōu)級(jí)純?cè)噭?，并?℃保存
（9） 氨羧絡(luò)合劑為乙二胺四乙酸的二鈉鹽
（10） 國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心： 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為1000μg/mL
（11） 鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制：取10mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，移入100 mL容量瓶中，用去離子水定容至100mL
4.操作步驟
（1） 標(biāo)定EDTA濃度：取0.5mL鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用EDTA溶液滴定，標(biāo)定其EDTA的濃度，根據(jù)滴定結(jié)果計(jì)算出每毫升EDTA相當(dāng)于鈣的毫克數(shù)，即滴定度T
（2）樣品及空白滴定：吸取0.1mL樣品消化液及空白液于試管中，加1滴氰化鈉溶液和0.1mL檸檬酸鈉溶液，用滴定管加1.5mL氫氧化鉀溶液，再加3滴鈣紅指示劑，立即以稀釋10倍的EDTA溶液滴定，直到指示劑由紫變藍(lán)為止。
5.計(jì)算：
                  T×(V-V0）×f×100
X （mg/100g）= ---------------------------
                  m
式中：T---EDTA滴定度 mg/mL
V----滴定樣品時(shí)所用EDTA量 mL
V0---滴定空白時(shí)所用EDTA量 mL
v----樣品定溶體積 mL
f-----稀釋倍數(shù)
m----取樣量 g （固體重量為g ，液體為mL）
本方法的檢測(cè)范圍為：5-50μg
6.注意事項(xiàng)
樣品處理要防止污染，所用器皿均應(yīng)使用塑料或玻璃制品，使用的試管器 皿均應(yīng)在使用前泡酸，并用去離子水沖洗干凈，干燥后使用。樣品消化時(shí)注意酸不要燒干，以免發(fā)生危險(xiǎn)。加指示劑后，不要等太久，最好加后立即。加氰化鈉和檸檬酸鈉目的是除去其他離子的干擾。滴定時(shí)的pH為12～24。